人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書產(chǎn)品簡介:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu) 表達。
人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書工作原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)表達。用純化的 人 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗 滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終 的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定 標本中人 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)的存在與否。
人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒產(chǎn)品規(guī)格: 1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟
1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不 觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
計算和結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10 臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu) 陰性
陽性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為 1,3-βD 葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)
陽性.
人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項:1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須 注意安全。
人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)酶聯(lián)免疫分析試劑盒儲存方式:1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月
主要用途:通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒是一種旨在從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體細胞器的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、能量代謝、蛋白組學(xué)和病理生理學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產(chǎn)量和純度堪稱同類產(chǎn)品最佳。
通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒注意事項
1. 本產(chǎn)品為10次(1克動物組織或5 X 107細胞)或50次(200毫克動物組織或1 X 107細胞)操作
2. 實際操作的動物組織重量或細胞量與試劑使用量按比例調(diào)整:例如200毫克動物組織:試劑用量是標準用量的五分之一
3. 所有操作均須嚴格在4℃或以下狀態(tài)進行
4. 操作時,須戴手套
5. 操作時,須無菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(Reagent B)和保存液(Reagent E)
6. 建議使用足夠的樣品量
7. 建議嚴格控制操作時間
8. 通常勻化次數(shù)為20至40下(或細胞顆粒群/組織塊狀消失為止)達到80%的細胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度:完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加勻化次數(shù)
9. 通常孵育5分鐘(不宜超過5分鐘)達到80%的細胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細胞裂解程度:完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數(shù)
10. 對于難以裂解的細胞,例如HeLa細胞,采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術(shù)處理
11. 通常1克動物組織或5 X 107細胞的線粒體含量為50微克以上線粒體蛋白
12. 如果需要計量線粒體,稀釋后數(shù)分鐘內(nèi)完成,否則線粒體將分解
13. 本產(chǎn)品所獲得的線粒體純度和產(chǎn)量最為理想。通過調(diào)整10000g離心速度到3000至8000g,可以提高粗提的線粒體純化程度,但線粒體產(chǎn)量相應(yīng)減少
14. 如果需要獲得99%以上純度的線粒體,使用動物細胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒-GMS10006.3
15. 線粒體正常活性測定方法是: CITRATE SYNTHASE活性、氧化磷酸化、細胞色素吸收峰譜等
16. 線粒體內(nèi)外膜完整測定方法是:CYTOCHROME C OXIDASE活性和熒光JC染色
17. 本公司提供線粒體套餐:ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、線粒體溶解等
18. 本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品
通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒質(zhì)量標準
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的線粒體內(nèi)外膜完整
3. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的線粒體維持正;钚
4. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶
通用型線粒體DNA的片段常見缺失(CD4977)定性分析試劑盒 保存方式
保存凈化液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月
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